Razlika med GFP in EGFP - Razlika Med

Razlika med GFP in EGFP

The glavna razlika med GFP in EGFP GFP (označuje zeleni fluorescenčni protein) je beljakovina, ki ima svetlo zeleno fluorescenco, kadar je izpostavljena modri svetlobi, medtem ko EGFP (pomeni razširjeni zeleni fluorescenčni protein) kaže močnejšo fluorescenco kot GFP. Poleg tega je še ena pomembna razlika med GFP in EGFP ta, da je GFP divji tip beljakovin, izoliran iz meduz, Aequorea victoria. Vendar je EGFP inženirska varianta prvotnega divjega tipa.

GFP in EGFP sta dve vrsti proteinov, ki služita kot notranje kromofore. Ne zahtevajo nobenih dodatnih encimov / substratov, kofaktorjev ali genskih produktov, ki bi pokazali njegovo barvo. Zato se oba uporabljata kot reporter genske ekspresije v molekularni biologiji.

Pokrita ključna območja

1. Kaj je GFP
     – Definicija, struktura, pomen
2. Kaj je EGFP
     – Definicija, struktura, pomen
3. Kakšne so podobnosti med GFP in EGFP
     – Oris skupnih funkcij
4. Kakšna je razlika med GFP in EGFP
     – Primerjava ključnih razlik

Ključni pogoji

Kromofor, EGFP, GFP, zelena fluorescenca, divji tip beljakovin


Kaj je GFP

GFP (zelena fluorescentna beljakovina) je beljakovina, ki sveti zeleno pod modro ali UV svetlobo. Seveda se pojavlja v meduzah, Aequorea Victoria. GFP je sestavljen iz 238 aminokislin. Velikost GFP je 26,9 kDa. GFP je močno orodje v molekularni biologiji zaradi svoje notranje fluorescence brez kakršne koli dodatne molekule. Fluorescenca je posledica kovalentne preureditve sosednjih aminokislin proteina. Po zlaganju proteina glavni atomi verige, Ser65, Tyr66 in Gly67 tvorijo visoko konjugirano, planarnostr-hidroksibenzilidenimidazolinon kromofor v prisotnosti O2. Študije kristalne strukture kažejo, da pakiranje kromofora v jedro strukture β-cevi molekule ga varuje pred gašenjem s paramagnetnim kisikom, vodnimi dipoli ali cis-trans izomerizacijo. Poleg tega nekovalentne interakcije kromofora s sosednjimi molekulami povečujejo njene spektralne lastnosti.


Slika 1: Predstavitev traku GFP in Fluorophore

GFP se lahko vnese v organizem med transgenskimi spremembami. Ohranja se lahko tudi skozi generacije. Glavna pomanjkljivost GFP divjega tipa je zmanjšana učinkovitost proteina v celičnem slikanju, ki je posledica nizkega izkoristka pri fizioloških temperaturah, kot je 37 ° C, spuščanje fluorescentnega signala. Tudi stopnja zorenja GFP znotraj celice gostiteljice je počasna, medtem ko se nagiba k agregaciji. Zaradi prisotnosti dveh različnih oblik kromofora lahko opazimo dve ekscitacijski vrhovi. Vendar je beljakovinski inženiring rešil večino problemov z uvedbo variantnih oblik divjega tipa GFP.

Kaj je EGFP

EGFP (povečan zeleni fluorescenčni protein) je varianta divjega tipa GFP z emisijami z višjo intenzivnostjo glede na GFP. Je ena izmed prvih in najpomembnejših variant GFP. Dve mutaciji, F64L in S65T, tvorita EGFP z večjo učinkovitostjo zlaganja pri 37 ° C. Zanimivo je, da ima EGFP en sam vrh vzbujanja pri ~ 490 nm zaradi zatiranja 395 nm vrha s S65T, ker modulira ionizirano stanje Glu222 v bližini. Po drugi strani pa F64L poveča učinkovitost zlaganja pri 37 ° C. Pomembno je, da je kodonska sekvenca EGFP optimizirana za ekspresijo v celicah sesalcev.


Slika 2: Izraz EGFP

Podobnosti med GFP in EGFP

  • GFP in EGFP sta beljakovini, ki imata svetlo zeleno fluorescenco, kadar sta izpostavljeni modri svetlobi.
  • Oboje lahko služi kot notranji kromofor brez dodatnih encimov / substratov, kofaktorjev ali genskih produktov, ki kažejo njegovo barvo.
  • S kromoforom tvorijo klasično β-cevko, ki vsebuje spiralo, ki teče skozi jedro strukture.
  • Uporabljajo se kot reporter izražanja v molekularni biologiji.

Razlika med GFP in EGFP

Opredelitev

GFP: Bel divji tip beljakovin, ki ima modro ali UV svetlobo zeleno fluorescenco in se naravno pojavlja v meduzah, Aequorea Victoria

EGFP: Različica GFP divjega tipa z emisijami z večjo intenzivnostjo glede na GFP

Pomeni

GFP: Zeleni fluorescenčni protein

EGFP: Izboljšan zeleni fluorescenčni protein

Izvor

GFP: Divji tip

EGFP: Mutant

64th Aminokislina

GFP: Fenilalanin

EGFP: Leucin

65th Aminokislina

GFP: Serin

EGFP: Threonine

Svetlost barve

GFP: Svetlo zelena

EGFP: Svetlejša zelena

Vzbujevalni vrhovi

GFP: Dva vrhova (395 nm in 490 nm)

EGFP: En sam vrh (490 nm)

Učinkovitost zlaganja pri 37 ° C

GFP: Nizka

EGFP: Visoka

Zaključek

GFP je divji tip beljakovin, ki kaže svetlo zeleno fluorescenco, kadar je izpostavljen modri ali UV svetlobi. EGFP je varianta GFP, ki kaže fluorescenco z večjo intenzivnostjo v primerjavi z GFP. Glavna razlika med GFP in EGFP je torej intenzivnost zelene fluorescence, ki jo vsaka beljakovina oddaja.

Sklic:

1. Arpino, James A. J., et al. "Kristalna struktura izboljšanega zelenega fluorescentnega proteina do 1,35 Å resolucija razkriva alternativne konformacije za Glu222."Medicina PLOS, Public Library of Science, časopisi.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0047132.

Vljudnost slike:

1. “Gfp in fluorophore” Raymond Keller (Raymond Keller (pogovor)), pod okriljem Crystal Proteina. - lastno delo (