Razlika med južnim severnim in zahodnim blotingom - Razlika Med

Razlika med južnim severnim in zahodnim blotingom

The glavna razlika med južno severno in zahodno blotanje je to Southern blotting vključuje identifikacijo DNA, in Northern bloting vključuje identifikacijo RNA, medtem ko Western bloting vključuje identifikacijo proteinov.

Južna, severna in zahodna so tri bloting tehnike, ki se uporabljajo za detekcijo specifične DNA, RNA ali proteinske molekule v vzorcu. Med čiščenjem se makromolekule prenesejo na membrano iz gela in se navezujejo na specifično nukleinsko kislino ali protitelesa, ki pomagajo pri detekciji.

Pokrita ključna območja

1. Kaj je Southern Blotting
     – Definicija, postopek, aplikacije
2. Kaj je Northern Blotting
     – Definicija, postopek, aplikacije
3. Kaj je Western Blotting
     – Definicija, postopek, aplikacije
4. Kakšne so podobnosti med južnim severnim in zahodnim blotingom
     – Oris skupnih funkcij
5. Kakšna je razlika med južnim severnim in zahodnim blotingom
     – Primerjava ključnih razlik

Ključni pogoji

Antitijelo, DNA, elektroforeza, Northern Blotting, RNA, beljakovine, južni blotting, Western blotting


Kaj je Southern Blotting

Southern blotting je tehnika, ki se uporablja za zaznavanje specifičnega zaporedja DNA v mešanici DNA. Osnovni koraki Southern blot so spodaj.

Elektroforeza - Vzorce DNK ločuje na ločene pasove, ki temeljijo na velikosti z elektroforezo v gelu.

Prenos - Med prenosom je nitrocelulozna membrana v stiku z gelom in DNK trakovi se premaknejo na membrano skozi kapilarno delovanje.

Odkrivanje določenih zaporedij - Ciljna sekvenca na membrani se hibridizira s specifično označeno oligonukleotidno sekvenco, ki se imenuje hibridizacijska sonda. Hibridizacijska sonda je kratka, velikost 100-500 bp, enoverižna DNA molekula. Stičnost, ki je odvisna od temperature in koncentracije soli hibridizacijskega pufra, vpliva na hibridizacijo. Visoka strogost, ki jo določajo visoka temperatura in nizka koncentracija soli, povečuje specifičnost hibridizacije, nizka strogost, ki jo določajo nizka temperatura in visoka koncentracija soli, zmanjšuje specifičnost.


Slika 1: Southern Blotting

Glavni namen Southern blottinga je odkriti specifično zaporedje DNA v vzorcu. Tehnika se uporablja pri DNA prstnih odtisih, testiranju očetovstva, identifikaciji žrtev in kriminalni identifikaciji. Pomaga tudi pri identifikaciji specifičnih genov, v RFLP (polimorfizem dolžine omejevalnih fragmentov), ​​mutacije in identifikacije preureditve genov, genetskih bolezni in povzročiteljev infekcij.

Kaj je Northern Blotting

Northern blotting je tehnika, ki se uporablja za zaznavanje specifične RNA v mešanici RNA. Osnovni koraki severnega čiščenja so naslednji.

Elektroforeza - Razdeli vzorec RNA glede na velikost v ločene pasove.

Prenos - S kapilarnim delovanjem se RNA pasovi v gelu prenesejo na membrano.

Odkrivanje specifičnih sekvenc - Ciljna RNA sekvenca se detektira s hibridizacijo z označeno oligonukleotidno sondo, sestavljeno iz DNA.


Slika 2: Northern Blotting

Ker lahko Northern bloting identificira specifično RNA zaporedje v vzorcu, ga lahko uporabimo v študijah genske ekspresije. Pomaga lahko tudi pri diagnozi bolezni.

Kaj je Western Blotting

Western blot je bloting tehnika, ki se uporablja za zaznavanje specifične aminokislinske sekvence v zmesi proteinov. Osnovni koraki Western Blot so spodaj.

Elektroforeza - Posamezne beljakovine se ločijo glede na velikost v pasove s SDS PAGE.

Prenos - Proteinski trakovi v gelu se prenesejo na membrano s pivkom.

Odkrivanje specifičnih beljakovin - Membrana z ločenimi beljakovinami se inkubira s primarnim protitelesom, ki se veže le na specifični protein. Za detekcijo primarnega protitelesa se uporablja sekundarno protitelo, ki je označeno z encimom, kot je peroksidaza hrena (HRP) ali alkalna fosfataza. Pri inkubaciji s substratom encimsko delovanje vizualizira vezavo protiteles na določeno območje na membrani.


Slika 3: Western blotting

Western blot se imenuje tudi beljakovinsko blot ali imunobloting. Identificira število beljakovin v vzorcu, prisotnost bakterij in virusa v serumu ter prisotnost protiteles proti virusu HIV v serumu. Prav tako lahko zazna pomanjkljive proteine. Poleg tega je Western bloting dokončen test za hepatitis B, Creutzfeldt-Jacobovo bolezen, lajmsko bolezen in Herpes.

Podobnosti med južno severno in zahodno blotanje

  • Southern blotting, Northern blotting in Western blotting so tri bloting tehnike, ki se uporabljajo za identifikacijo določene vrste makromolekul v vzorcu.
  • Trije koraki blot tehnike so elektroforeza, prenos in detekcija.
  • Vsaka tehnika zahteva denaturacijo in blokiranje s presežkom ustrezne makromolekule.
  • Vsaka tehnika ima aplikacije v biotehnologiji in medicini.

Razlika med južnim severnim in zahodnim blotingom

Opredelitev

Southern bloting se nanaša na postopek za identifikacijo specifičnih sekvenc DNA, medtem ko se Northern blot nanaša na prilagoditev postopka Southern blot, ki se uporablja za odkrivanje specifičnih sekvenc RNA s hibridizacijo z komplementarno DNA in Western bloting se nanaša na postopek blotinga, ki se uporablja za identifikacijo specifičnega amino -kislinska zaporedja v beljakovinah.

Razvil

Southern blotting je leta 1975 razvil Edward M. Southern. North blotting je razvil Alwine in njegovi sodelavci leta 1979, Western Stark pa je leta 1979 razvil Western bloting.

Zaznana molekula

Southern blotting zazna specifične sekvence DNA, Northern blot detektira specifične RNA sekvence, medtem ko Western blot detektira specifične proteine.

Elektroforeza v gelu

Južno blotiranje vključuje elektroforezo v agaroznem gelu in severno blotiranje vključuje denaturiranje formaldehidnega agaroznega gela, medtem ko Western bloting vključuje SDS PAGE.

Metoda popivnitve

Tako južno kot severno blotiranje vključujeta prenos kapilar, medtem ko zahodno blotiranje vključuje električni prenos.

Sonde

Southern blotting uporablja DNK sondo, medtem ko Northern blot uporablja cDNA sonde in Western bloting uporablja primarne in sekundarne protitelesa.

Uporaba

Southern blotting se uporablja za identifikacijo specifičnih genskih sekvenc in DNA prstnih odtisov. Za analizo genske ekspresije se uporablja Northern blot, pri diagnostiki bolezni pa se uporablja Western blot.

Zaključek

Southern bloting identificira specifično DNA sekvenco, medtem ko Northern bloting identificira specifično RNA sekvenco in Western bloting identificira specifično proteinsko zaporedje v vzorcu. Zato je glavna razlika med tremi tehnikami blotiranja tip makromolekul, ki jih zaznajo.

Sklic:

1. “Southern Blotting: princip, postopek in uporaba -.” ONLINE BIOLOGY NOTES, 4. december 2017,