Kakšna je razlika med direktnim in posrednim ELISA testom - Razlika Med

Kakšna je razlika med direktnim in posrednim ELISA testom

The glavna razlika neposrednega in posrednega ELISA v neposrednem ELISA je primarno protitelo neposredno konjugirano z encimom za detekcijo, medtem ko je pri posrednem ELISA sekundarno protitelo, ki je komplementarno primarnemu protitelesu, konjugirano z encimom za detekcijo. To pomeni, da neposredno ELISA uporablja eno samo protitelo, medtem ko posredno ELISA uporablja dve protitelesi.

Neposredna in posredna ELISA sta dve metodi ELISA (encimsko vezani imunosorbantni test), ki se uporablja za odkrivanje prisotnosti specifičnega antigena ali protitelesa v gojišču.

Pokrita ključna območja

1. Kaj je Direct ELISA
- Opredelitev, postopek, značilnosti
2. Kaj je posredna ELISA
- Opredelitev, postopek, značilnosti
3. Kakšne so podobnosti med neposrednim in posrednim ELISA testom
- oris skupnih funkcij
4. Kakšna je razlika med direktnim in posrednim ELISA testom
- Primerjava ključnih razlik

Ključni pogoji

Neposredno ELISA, detekcijski encim, posredna ELISA, primarno protitelo, sekundarno protitelo, substrat t


Kaj je Direct ELISA

Neposredna ELISA je metoda ELISA, ki omogoča odkrivanje antigena s samim encimom vezanim primarnim protitelesom. Ta metoda ELISA je bila najprej razvita Perlmann in Engvall. Šteje se kot najpreprostejša oblika ELISA. Koraki neposrednega ELISA so navedeni spodaj: t

  1. Oblaganje površine plošče z vzorcem;
  2. Inkubacija plošče s konjugiranim encimom, primarnim protitelesom;
  3. Pranje za odstranitev nevezanih protiteles s plošče;
  4. Dodajanje substrata, ki ga zahteva encimska reakcija;
  5. Odkrivanje signalov, ki nastanejo s plošče.

Pri tem sta glavni vrsti encimov, konjugiranih s primarnim protitelesom, HRP (peroksidaza hrena) in alkalna fosfataza. Tri vrste substratov, ki se uporabljajo skupaj s HRP, so OPD (o-fenilendiamin dihidroklorid), TMB (3, 3 ', 5, 5'-tetrametilbenzidin) in ABTS (2, 2'-azinobis [3-etilbenzotiazolin-6-]. sulfonska kislina] -diamonijeva sol). Uporabljen substrat skupaj z alkalno fosfatazo je PNPP (p-nitrofenil fosfat, dinatrijeva sol).Encimska reakcija na substratu povzroči spremembo barve v mediju, ki je odvisna od vrste substrata in encima, uporabljenega za reakcijo. To olajša odkrivanje vzorcev s ciljnim antigenom.


Slika 1: Neposredna ELISA

Neposredna ELISA je bolj primerna za odkrivanje količine antigena z visoko molekulsko maso v vzorcu. Manjše število korakov v tej metodi ELISA omogoča hitrejši test. Vendar pa je zaradi stroškov in časa, vključenega z označevanjem primarnih protiteles z encimi, uporaba neposrednega testa ELISA zelo redka. Po drugi strani pa povzroča škodljive učinke tudi na ciljni antigen.

Kaj je Indirektna ELISA

Indirektna ELISA je druga metoda ELISA, ki uporablja dva protitelesa za detekcijo: primarno in sekundarno protitelo. Postopki posrednega ELISA so naslednji: t

  1. Oblaganje površine plošče z vzorcem;
  2. Inkubacija plošče s primarnim protitelesom;
  3. Pranje za odstranitev nevezanih protiteles s plošče;
  4. Inkubacija plošče s sekundarnim protitelesom, konjugiranim z encimom za detekcijo;
  5. Pranje za odstranitev nevezanih protiteles s plošče;
  6. Dodajanje substrata, ki ga zahteva encimska reakcija;
  7. Odkrivanje signalov, ki nastanejo s plošče.


    Slika 2: Posredna ELISA

Indirektni ELISA poteka skozi dva koraka vezave protiteles. Po drugi strani pa je sekundarno protitelo konjugirano z encimom za detekcijo. Na splošno obstaja veliko sekundarnih protiteles, konjugiranih z encimi. Tukaj je sekundarno protitelo v glavnem poliklonsko protitelo proti vrstam. Zaradi razpoložljivosti encimsko konjugiranih protiteles se metoda indirektne ELISA pogosteje uporablja v imunoloških testih pri odkrivanju parazitov, bakterij in virusov. Po drugi strani pa je lahko več sekundarnih protiteles vezanih na primarno protitelo v plošči. Zato je občutljivost testa zelo visoka.

Podobnosti med neposrednim in posrednim ELISA testom

  • Neposredna in posredna ELISA sta dve metodi ELISA, v kateri je antigen, ki nas zanima, neposredno vezan na ploščo.
  • Obe metodi vključujejo odkrivanje prisotnosti specifične proteinske molekule v vzorcu. Ta beljakovinska molekula je neposredno vezana na ploščo.
  • Pri obeh metodah uporabljamo plošče s 96 vdolbinami ali 8-vdolbinske cevi. Obe ploščici in cevi sta narejeni iz polistirena. Plošče s 96 vdolbinicami zagotavljajo dovolj prostora za določanje optimalne razredčitve za reakcijo. Medtem pa so 8-jajne epruvete bolje za fino nastavljene teste.

Razlika med neposrednim in posrednim ELISA testom

Opredelitev

Direct Elisa se nanaša na tip ELISA, pri katerem je primarno protitelo konjugirano z encimom za detekcijo, medtem ko se indirektni ELISA nanaša na tip ELISA, pri katerem je sekundarno protitelo konjugirano z encimom za detekcijo.

Število uporabljenih protiteles

Neposredno ELISA uporablja eno protitelo, ki je primarno protitelo, medtem ko posredno ELISA uporablja dve protitelesi, primarno in sekundarno protitelo. To je glavna razlika med neposrednim in posrednim ELISA testom.

Enzim zaznavanja je povezan z

Poleg tega je encim za odkrivanje povezan s primarnim protitelesom v neposrednem ELISA, medtem ko je encim za odkrivanje povezan s sekundarnimi protitelesi v posrednem ELISA testu.

Intenzivnost signalov

Druga razlika med neposrednim in posrednim ELISA testom je, da so signali, ki jih proizvaja neposredni ELISA, manj intenzivni, medtem ko so signali, ki jih povzroča posredna ELISA, intenzivnejši zaradi ojačanja signala.

Signali ozadja

Vendar pa neposredni test ELISA proizvede več ozadnih signalov kot posredni ELISA.

Občutljivost

Neposredna ELISA je manj občutljiva, medtem ko je posredna ELISA bolj občutljiva. To je tudi razlika med neposrednim in posrednim ELISA testom.

Navzkrižna reaktivnost

Še ena razlika med neposrednim in posrednim ELISA je navzkrižna reaktivnost. To pomeni, da je navzkrižna reaktivnost pri neposrednem testu ELISA minimalna, medtem ko je pri indirektni ELISA pomembna.

Čas

Poleg tega je direktni test ELISA manj zamuden zaradi manjšega števila korakov, medtem ko je posredni test ELISA zaradi podvojenih korakov vezave protiteles bolj zamuden.

Pogostost uporabe

Medtem ko je neposredni test ELISA razmeroma redek, je posredna ELISA pogostejša.

Zaključek

Neposredna ELISA uporablja samo primarno protitelo za odkrivanje specifičnega antigena. To pomeni, da je primarno protitelo konjugirano z encimom za detekcijo v direktnem ELISA testu. Vendar pa posredni ELISA uporablja primarno protitelo za vezavo z antigenom, medtem ko se sekundarno protitelo, vezano na encim, veže na primarno protitelo. Neposredna ELISA je manj pogosta zaradi manjše razpoložljivosti primarnih protiteles, vezanih na encime. Glavna razlika med neposrednim in posrednim ELISA je število uporabljenih protiteles.

Sklic:

1. „Vrste ELISA“.Bio-Rad, Bio-Rad Laboratories,