Kakšna je razlika med GFP in YFP - Razlika Med

Kakšna je razlika med GFP in YFP

The glavna razlika med GFP in YFP GFP ima ob izpostavljenosti svetlobi zeleno barvo od modre do ultravijolične, medtem ko ima YFP ob izpostavljenosti isti svetlobi rumeno barvo. Poleg tega je GFP prvotno pridobljen iz meduz, Aequorea Victoria medtem ko je YFP genetski mutant GFP proteinov.

GFP (zelena fluorescenčna beljakovina) in YFP (rumena fluorescenčna beljakovina) sta dve vrsti fluorescenčnih beljakovin, ki kažejo različne barve fluorescentne ob izpostavljenosti svetlobi od modre do ultravijolične. Vendar pa je njihova uporaba v molekularni biologiji enaka.

Pokrita ključna območja

1. Kaj je GFP
- Definicija, funkcije, aplikacije
2. Kaj je YFP
- Definicija, funkcije, aplikacije
3. Kakšne so podobnosti med GFP in YFP
- oris skupnih funkcij
4. Kakšna je razlika med GFP in YFP
- Primerjava ključnih razlik

Ključni pogoji

Fluorescentni proteini, GFP (zeleni fluorescenčni protein), derivati ​​GFP, YFP (rumeni fluorescentni protein)


Kaj je GFP

GFP (zelena fluorescentna beljakovina) je bioluminiscenčni polipeptidni protein, ki se naravno pojavlja v meduzah, Aequorea Victoriain mnogih drugih morskih organizmov. V Aequorea Victoriaje znana kot aequorin in oddaja fluorescenco, ko je izpostavljena razponom od modre do ultravijolične svetlobe. To pomeni; GFP popolnoma absorbira modro svetlobo (475 nm) ali 395 nm svetlobo v dolgem UV območju in oddaja zeleno svetlobo (509 nm).


Slika 1: Aequorea Victoria

GFP protein vsebuje 238 aminokislin in velikost proteina je 26,9 kDa. Zloži se v obliko beta-cevi. Tukaj del proteina, ki ga naredi fluorescenčno, nastane iz konjugacije glavnih atomov verige, Ser65, Tyr66 in Gly67, ki tvori visoko konjugiran, planarni p-hidroksibenzilidenimidazolinon kromofor v prisotnosti kisika. Kromofor je pakiran v strukturo beta-cevi, ki ščiti kromofor pred gašenjem s pomočjo paramagnetnega kisika, vodnih dipolov ali cis-trans izomerizacije. Prav tako nekovalentne interakcije kromofora s sosednjimi molekulami povečujejo njene spektralne lastnosti.


Slika 2: Struktura GFP

Poleg tega se GFP uporablja v molekularni biologiji kot reporter ekspresije genov, kar dokazuje izražanje tujega gena v organizmu gostitelja. Prav tako ga lahko uporabimo za določanje podceličnih lokacij, kjer se bo določena beljakovina eksprimirala. Pri tem je zanimiv protein fuziran z GFP in ta fuzijski protein se transformira v gostitelja.


Slika 3: Izraz EGFP

Vendar je glavna pomanjkljivost divjega tipa GFP njegova zmanjšana učinkovitost zaradi nizkega izkoristka pri fizioloških temperaturah, kot je 37 ° C, spuščanje fluorescentnega signala. Tudi nizka stopnja zorenja GFP omogoča, da se beljakovina agregira v celici. Okrepljen GFP (EGFP) je derivat divjega tipa GFP s točkovno mutacijo 37 ° C (F64L) na oder, ki ga proizvaja mutacija z eno točko (S65T) z izboljšanimi spektralnimi lastnostmi, vključno s povečano fluorescenco, fotostabilnostjo in premik glavnega vzbujalnega vrha na 488 nm, pri čemer je najvišja emisija ohranjena pri 509 nm.

Kaj je YFP

YFP (rumeni fluorescenčni protein) je derivat GFP, uveden kot genska mutacija. Pravzaprav je barvni mutant, ki ga doseže mutacija T203Y. To ima za posledico interakcije med nabojnimi tirozinskimi ostanki in kromoforjem. Zato YFP absorbira svetlobo zelene barve pri valovni dolžini 514 nm, pri čemer svetlobo rumene barve pri 527 nm.


Slika 4: Izvedeni finančni instrumenti GFP

Poleg tega so Citrine, Venus in YPet tri izboljšane različice YFP. Prihajajo s skupnimi lastnostmi, vključno z zmanjšano občutljivostjo na klorid, hitrejšim zorenjem in povečano svetlostjo. Glavni pomen YFP v molekularni biologiji je, da služi kot akceptor za genetsko kodirane senzorje FRET (Försterjev resonančni prenos energije). Tu je najpogostejši donorski fluorescenčni protein monomerni cian fluorescenčni protein (mCFP), ki je še en GFP derivat.

Podobnosti med GFP in YFP

  • GFP in YFP sta dve vrsti fluorescenčnih beljakovin s podobno uporabo v molekularni biologiji.
  • Oboje lahko oddaja fluorescenco ob izpostavljenosti svetlobi, ki sega od modre do ultravijolične.
  • Geni fluorescenčnih proteinov se uporabljajo kot reporterji za izražanje genov.
  • Tudi te proteine ​​lahko eksprimiramo znotraj različnih organizmov, vključno s človeškimi, sesalskimi, ribjimi, glivičnimi, kvasnimi in bakterijskimi celicami.
  • Poleg tega se geni fluorescenčnih proteinov vnesejo v gostiteljske celice s tehnologijo rekombinantne DNA.

Razlika med GFP in YFP

Opredelitev

GFP se nanaša na beljakovino, ki sveti zeleno pod fluorescentno svetlobo in se naravno nahaja v meduzah, Aequorea Victoria, medtem ko se YFP nanaša na genetski mutant zelenega fluorescentnega proteina (GFP). To je torej temeljna razlika med GFP in YFP.

Pomeni

GFP je zelena fluorescentna beljakovina, YFP pa rumena fluorescentna beljakovina.

Oddaja barvo pod UV

Kot navajajo njihova imena, je glavna razlika med GFP in YFP ta, da GFP oddaja zeleno barvno luč, medtem ko YFP oddaja rumeno barvno luč.

Pojavnost

Poleg tega se GFP naravno pojavlja v mnogih morskih organizmih, vključno z meduzami, Aequorea Victoria medtem ko je YFP genetski mutant GFP. Zato je to še ena razlika med GFP in YFP.

Vzbujalni vrh

Poleg tega je glavni vzbujalni vrh GFP pri 395 nm in manjši vrh vzbujanja pri 475 nm, medtem ko je ekscitacijski vrh YFP pri 514 nm.

Emisijski vrh

Tudi emisijski vrh GFP je pri 509 nm, medtem ko je emisijski vrh YFP pri 527 nm. To je torej tudi razlika med GFP in YFP.

Aplikacije

Poleg tega je še ena pomembna razlika med GFP in YFP ta, da je GFP pomemben kot reporter izražanja in vizualizirati lokalizacijo zlitega proteina, medtem ko se YFP uporablja kot neinvazivni intracelularni pH biosenzorji ali fluorescenčni indikatorji za lokalno Ca.2+ koncentracijah.

Zaključek

GFP je fluorescenčni protein, ki se naravno pojavlja v meduzah, Aequorea Victoria. Uporablja se v molekularni biologiji kot reporter izražanja in vizualizira lokalizacijo zlitega proteina. Na splošno GFP oddaja svetlo zeleno fluorescenco ob izpostavljenosti modri do ultravijolični svetlobi. Za primerjavo, YFP je genetski mutant GFP, ki pri izpostavljenosti modri do ultravijolični svetlobi oddaja rumeno fluorescenco. Zato je glavna razlika med GFP in YFP barva fluorescence, ki jo oddajajo, in njihov izvor.

Reference:

1. “Zeleni fluorescentni protein (GFP).” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific,