Kakšna je razlika med MTT in MTS analizo - Razlika Med

Kakšna je razlika med MTT in MTS analizo

The glavna razlika med testom MTT in MTS MTT test ima dodaten korak, povezan s solubilizacijo kristalov formazana, medtem ko MTS test ni povezan s solubilizacijo kristalov formazana

Test MTT in MTS sta dve vrsti testov za merjenje viabilnosti celic in vitro. Pomagajo odkriti učinek testnih molekul na celično proliferacijo in citotoksičnost, kar vpliva na sposobnost preživetja celic. Poleg tega je MTT test bolj dolgotrajen kot MTS test.

Pokrita ključna območja

1. Kaj je test MTT
- Opredelitev, proces, pomen
2. Kaj je MTS Assay
- Opredelitev, proces, pomen
3. Kakšne so podobnosti med MTT in MTS analizo
- oris skupnih funkcij
4. Kakšna je razlika med MTT in MTS analizo
- Primerjava ključnih razlik

Ključni pogoji

Proliferacija celic, celična vitalnost, citotoksičnost, MTS test, MTT test


Kaj je test MTT

MTT test je prvi homogen test preživetja celic, razvit za obliko 96 vdolbin, primerno za visoko zmogljivostno pregledovanje (HTS). Načelo tega testa je določiti viabilnost celic na podlagi sposobnosti celic, da zmanjšajo tetrazolijevo barvo z delovanjem encima, NAD (P) H-odvisne celične oksidoreduktaze, ki je prisotna v živih celicah. Tukaj je tetrazolijevo barvo, uporabljeno za MTT test, 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil-tetrazolijev bromid, ki je rumene barve. Zgoraj omenjeno encimsko delovanje ima za posledico tvorbo netopnega produkta formazana v obliki kristalov, ki se obarjajo v celicah in blizu celične površine in v gojišču. Ker pa se količina formazanskega proizvoda meri z merjenjem absorbance, je treba netopne kristale najprej solubilizirati, nato pa se absorbanca lahko izmeri pri 570 nm.


Slika 1: Reakcija MTT

Kljub temu, da MTT test uporablja manj materialov in korakov, ima ta metoda nekaj pomanjkljivosti. Preskus ni primeren za suspendiranje celic. Poleg tega lahko oborjeni proteini in celični ostanki, ki so prisotni v vzorcu, vplivajo na merjenje absorbance, zmanjšajo občutljivost in natančnost preskusa. Prav tako je treba čas testiranja in število celic v vzorcu optimizirati za vsak tip celice.

Kaj je MTS Assay

MTS test je nova metoda za MTT analizo, saj uporablja nov tip tetrazolijevega barvila, ki končno povzroči vodni, topni formazanski produkt. Tukaj je tetrazolijevo barvo, ki se uporablja v MTS analizi, 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -5- (3-karboksimetoksifenil) -2- (4-sulfofenil) -2H-tetrazolij. Nastajanje topnega formazanskega barvila nastopi v prisotnosti fenazin metosulfata (PMS), ki služi kot vmesni akceptor elektrona, ki prenaša elektrone iz NADH, da zmanjša tetrazolijevo barvo in tvori produkt topnega formazana.


Slika 2: Plošča MTT

Neposredno tvorjenje topnega produkta formazana zmanjša stopnjo solubilizacije formazanov produkt testa MTT. Zato je MTS test učinkovitejši in manj zamuden. Prav tako odstrani potencialne napake, kot je izguba celic, kar se lahko zgodi med odstranitvijo medija in solubilizacijo formazanskega produkta. Poleg tega je nastali formazanski produkt temnejše barve; to poveča občutljivost in natančnost testa.

Podobnosti med MTT in MTS analizo

  • MTT in MTS test sta dve vrsti testov, ki določata viabilnost celic in vitro.
  • Oba testa pomagata oceniti učinek testnih molekul na celično proliferacijo in citotoksičnost.
  • Prav tako sta oba kolorimetrična testa.
  • Poleg tega ocenjujejo presnovno aktivnost celic na podlagi sposobnosti celic, da reducirajo barvo tetrazolija na formazan.
  • Poleg tega je encim, odgovoren za zgoraj navedeno redukcijo, NAD (P) H-odvisna celična oksidoreduktaza, ki je prisotna v živih celicah.
  • Poleg tega se reakcija redukcije odvija zunaj celice s prenosom elektronov v plazemski membrani.
  • MTT reagent je občutljiv na svetlobo; zato je treba te teste izvesti v temi.
  • Poleg tega je inkubacijski čas za oba testa enak po dodatku tetrazolijevega barvila in je 1 do 4 ure pri 37 ° C.

Razlika med MTT in MTS analizo

Opredelitev

MTT test se nanaša na kolorimetričnoesej za ocenjevanje presnovne aktivnosti celic, medtem ko se MTS test nanaša na "enostopenjski" MTT test, ki ponuja udobje dodajanja reagenta naravnost v celično kulturo brez intermitentnih korakov, ki so zahtevani v testu MTT. To je torej glavna razlika med testom MTT in MTS.

Vrsta barvila Tetrazolium, ki se uporablja v testu

Nadalje, medtem ko MTT test uporablja MTT (3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolijev bromid), MTS test uporablja MTS (3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -5 - (3-karboksimetoksifenil) -2- (4-sulfofenil) -2H-tetrazolij).

Topnost produkta Formazan

Tudi formazanski produkt v testu MTT je netopen, medtem ko je formazanski produkt v MTS testu topen. Zato je to pomembna razlika med testom MTT in MTS.

Merjenje absorpcije

Poleg tega se absorbanca izmeri pri 570 nm v MTT analizi, medtem ko se absorbanca meri pri 490 nm.

Čas

Čas je tudi razlika med testom MTT in MTS. MTS test je manj potraten kot MTT test.

Občutljivost in natančnost

Poleg tega je MTT test manj občutljiv in manj natančen, saj lahko celični ostanki in oborjene beljakovine vplivajo na merjenje absorbance, medtem ko je MTS test bolj občutljiv in natančen zaradi tvorbe temnejšega formazanskega izdelka.

Stroški

Druga razlika med analizo MTT in MTS je strošek. MTT test je cenejši od testa MTS.

Zaključek

MTT test je klasičen test za merjenje viabilnosti celic, da se oceni učinek testnih molekul na proliferacijo celic in citotoksičnost. Vendar pa je nastali produkt formazana v testu MTT netopen; zato ta preizkus zahteva dodaten korak za solubilizacijo formazanskega produkta. Nasprotno, MTS test je nova metoda za merjenje viabilnosti celic in uporablja novo vrsto tetrazolijeve soli, ki proizvaja topni formazan, kar zmanjšuje en korak v postopku testa MTT. Zato je MTS test bolj učinkovit v primerjavi z MTT testom. Glavna razlika med testom MTT in MTS je torej značilnost produkta formazan.

Sklic:

1. Riss TL, Moravec RA, Niles AL, et al. Preskusi vitalnosti celic. 2013 maj 1 [Posodobljeno 2016 1. julij]. V: Sittampalam GS, Coussens NP, Brimacombe K, et al., Uredniki. Navodila za testiranje [Internet]. Bethesda (MD): Eli Lilly & Company in Nacionalni center za razvoj translacijskih znanosti; 2004-.