Kakšna je razlika med toplo in hladno tripsinizacijo - Razlika Med

Kakšna je razlika med toplo in hladno tripsinizacijo

The glavna razlika med toplo in hladno tripsinizacijo je to topla tripsinizacija sodeluje pri inkubaciji tkiv s toplega tripsina pri 36.50 ° C, medtem ko je hladna tripsinizacija vključena v namakanje tkiv v hladnem tripsinu pri 4 ° C, čemur sledi inkubacija pri 36.50 ° C. Poleg tega je poškodba celic visoka pri topli tripsinizaciji, medtem ko hladna tripsinizacija zmanjša podaljšan učinek toplega tripsina na tkivo.

Topla in hladna tripsinizacija sta dve metodi tripsinizacije, metoda encimske disagregacije tkiv, ki se uporabljajo v primarni celični kulturi. Tukaj je tripsin proteolitični encim, ki razgrajuje proteine, ki so odgovorni za lepljenje celic v kulturah.

Pokrita ključna območja

1. Kaj je toplo tripsiniziranje
- Opredelitev, metoda, pomen
2. Kaj je hladna tripsinizacija
- Opredelitev, metoda, pomen
3. Kakšne so podobnosti med toplo in hladno tripsinizacijo
- oris skupnih funkcij
4. Kakšna je razlika med toplo in hladno tripsinizacijo
- Primerjava ključnih razlik

Ključni pogoji

Prilepljene beljakovine, hladna tripsinizacija, encimska razčlenitev, primarna celična kultura, tripsin, toplo tripsiniziranje


Kaj je toplo tripsiniziranje

Topla tripsinizacija je ena od dveh metod tripsiniziranja, ki se uporabljata pri encimski razčlenitvi tkiv pri pripravi na primarno celično kulturo. Neposredno uporablja topli tripsin pri 36,50 ° C za razčlenitev. Najprej sesekljano tkivo speremo z DBSS (disekcijo bazalne raztopine soli) in nato dodamo v bučko s toplega tripsina. Disociirane celice so v supernatantu in v vsakih 30 minutnih intervalih se vsebina bučke meša, da se pridobijo disociirane celice. Nato v mešanico dodamo svež tripsin. Ta postopek se lahko nadaljuje 3-4 ure, medtem ko se obnovijo disociirane celice. Končno lahko tripsin iz mešanice odstranimo s centrifugiranjem.


Slika 1: Topla tripsinizacija

Poleg tega je topla tripsinizacija najučinkovitejša metoda za pridobivanje celic, saj neposredno uporablja topli tripsin. Tudi ta postopek se lahko zaključi v nekaj urah. Vendar je donos živih celic manjši zaradi škodljivega učinka toplega tripsina.

Kaj je hladna tripsinizacija

Hladna tripsinizacija je druga metoda tripsina. Je manj učinkovita, vendar daje veliko količino živih celic. Ena od slabosti hladne tripsinizacije je čas, potreben za zaključek postopka. Na splošno pripravljena tkiva najprej namočimo s hladnim tripsinom pri 4 ° C približno 6-24 ur. Nato izločeno tkivo inkubiramo s preostalim tripsinom pri 36,50 ° C 20-30 minut. Ponavljajoče pipetiranje pomaga razpršiti ločene celice.


Slika 2: Hladno tripsiniziranje

Vendar, kot je bilo že omenjeno, je tveganje za poškodovane celice zaradi dolgotrajne izpostavljenosti toplemu tripsinu pri tej metodi minimalno. Zato ta metoda kaže izboljšano viabilnost celic v kulturi. Ta metoda je zaradi praznine centrifugiranja primerna tudi za konvencionalne laboratorije. Kljub temu je glavna pomanjkljivost te metode, da je ni mogoče uporabiti za večje količine tkiva naenkrat.

Podobnosti med toplo in hladno tripsinizacijo

  • Topla in hladna tripsinizacija sta dve tehniki tripsinizacije, ki uporabljata tripsin za encimsko disagregacijo adherenčnih proteinov v celičnih kulturah.
  • Obe metodi se lahko uporabita pri pripravi tkiv za primarne celične kulture.
  • Poleg tega obe metodi uporabita topel tripsin pri 36,50 ° C na neki točki.
  • Poleg tega pomagajo izolirati celice.

Razlika med toplo in hladno tripsinizacijo

Opredelitev

Topla tripsinizacija se nanaša na eno od dveh metod tripsinizacije, ki sta vključeni v inkubacijo tkiva s tripsinom pri 36.50 ° C, čemur sledi odstranitev tripsina s centrifugiranjem, medtem ko se hladna tripsinizacija nanaša na drugo metodo tripsina, ki je vključena v namakanje s tripsinom pri 4 ° C. ° C, čemur sledi inkubacija s tripsinom pri 36.50 ° C. To je torej glavna razlika med toplo in hladno tripsinizacijo.

Uporaba toplega tripsina (36,50 ° C)

Druga pomembna razlika med toplo in hladno tripsinizacijo je, da se tkivo tretira s toplim tripsinom 3-4 ure v topli tripsinizaciji, medtem ko se tkivo inkubira s toplim tripsinom 20-30 minut.

Centrifugiranje

Centrifugiranje je še ena razlika med toplo in hladno tripsinizacijo. Centrifugiranje je bistvenega pomena za toplo tripsinizacijo, da se iz vzorca odstrani tripsin, medtem ko centrifugiranje pri hladni tripsinizaciji ni potrebno.

Učinkovitost

Tudi topla tripsinizacija je učinkovitejša, medtem ko je hladna tripsinizacija manj učinkovita.

Pomen

Poleg tega je njihov pomen še ena razlika med toplo in hladno tripsinizacijo. Topla tripsinizacija lahko povzroči poškodbe celic v tkivu, medtem ko je bil neželeni učinek tople tripsinizacije odstranjen v hladni tripsinizaciji.

Dobitek vitalnih celic

Donos živih celic je še ena razlika med toplo in hladno tripsinizacijo. Topla tripsinizacija povzroči manjšo količino živih celic, medtem ko je izkoristek živih celic pri hladni tripsinizaciji velik.

Čas

Poleg tega je za toplo tripsinizacijo potrebno manj časa za dokončanje postopka, medtem ko za hladno tripsinizacijo potrebujemo več časa.

Aplikacije

Poleg tega se topla tripsinizacija uporablja za tkiva, ki vsebujejo zunajcelični matriks in vlaknasta vezna tkiva, medtem ko se hladna tripsinizacija uporablja za mehka tkiva, kot so zarodni organi.

Zaključek

Topla tripsinizacija je metoda trypsinizacije, ki uporablja topel tripsin pri 36,50 ° C za zdravljenje tkiv, da se razgradijo adherenčni proteini. Čeprav je učinkovita metoda encimatske disagregacije tkiv, zaradi manj škodljivega učinka toplega tripsina dobi manj živih celic. Za primerjavo, hladna tripsinizacija je druga metoda tripsinizacije, ki vključuje namakanje tkiva s hladnim tripsinom pri 4 ° C pred inkubacijo s toplim tripsinom. Ta metoda je manj učinkovita, vendar daje veliko število živih celic. Glavna razlika med toplo in hladno tripsinizacijo je torej uporaba toplega tripsina in pomembnost vsake metode.

Reference:

1. "Tripsinizacija."Scribd, Scribd,